Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
Инокулированную среду используют немедленно после ее приготовления.
Используя растворитель и буферный раствор, указанные в Таблице 2.7.2.-2, готовят растворы стандартного образца и испытуемого антибиотика, имеющие
известные концентрации и предположительно равные активности. Для оценки достоверности количественного определения используют не менее трех доз стандартного образца и трех доз испытуемого антибиотика. Предпочтительно использовать ряды доз, меняющихся в геометрической прогрессии. Для получения необходимой линейности может оказаться необходимым осуществить выбор из большого количества трех последовательных доз, используя соответствующие дозы для стандартного образца и испытуемого антибиотика.
Помещают равные объемы каждого из растворов в идентичные пробирки и добавляют в каждую пробирку равные объемы инокулированной среды (например, 1 мл раствора и 9 мл среды).
Одновременно готовят две контрольные пробирки без антибиотика, содержащие инокулированную среду. В одну из них немедленно добавляют 0,5 мл формальдегида. Эти пробирки используют для настройки оптического прибора, используемого для измерения роста.
Все пробирки, распределенные случайным образом, методом латинского квадрата или рандомизированного блочного распределения, помещают в водяную баню или в другой подходящий аппарат, позволяющий быстро довести температуру всех пробирок до соответствующей температуры инкубации и поддерживать их при этой температуре в течение 3-4 часов, обеспечивая однородность температурного режима и равное время инкубации.
По окончании инкубации рост микроорганизмов останавливают добавлением 0,5 мл формальдегида в каждую пробирку или тепловой обработкой и измеряют степень мутности, используя подходящий оптический прибор. Можно использовать метод, позволяющий измерять степень мутности в каждой пробирке по окончании одинаковых периодов инкубации.
Измеряют активность с использованием подходящих статистических методов.
Линейность преобразованной или не преобразованной зависимости реакции от дозы часто получается лишь в ограниченном промежутке. Именно в этом промежутке необходимо производить вычисление активности. Для подтверждения линейности определение проводят на трех последовательных дозах из этого промежутка. В рутинных анализах по согласованию с компетентными органами определение может проводиться по двум значениям при условии, что линейность подтверждена адекватным количеством экспериментов с использованием трех значений. Однако, во всех спорных случаях должно применяться вышеописанное определение по трем значениям.
В каждом определении используют достаточное для получения требуемой точности количество репликаций. Определение может быть проведено повторно, и результаты статистически комбинированы для получения требуемой точности и для подтверждения того, что активность испытуемого антибиотика не менее минимальных требований.
Таблица 2.7.2.-2
Количественное определение методом турбидиметрическим методом._______________
Антибиотик Стандартный Растворитель, Буферный Микроорганизм Среда и Темпе
образец используемый раствор (рН) конечное ратура
для приготов значение рН инкуба
ления раствора (±0,1 ед. рН) ции, 0C
Ванкомицина Ванкомицина Дистиллирован 8,0 Staphylococcus C; 8.0 37-39
гидрохлорид гидрохлорида ная вода aureus
ФСО ATCC 6538 P
CIP 53.156
Гентамицина Гентамицина Дистиллирован 7,0 Staphylococcus C; 7.0 35-37
сульфат сульфата ная вода aureus
ФСО NCTC 7447
CIP 53.156
ATCC 6538 P
Г рамицидин Гоамицидина Метанол 7,0. Может Streptococcus C; 7.0 35-37
ФСО оказаться faecalis
необходимым ATCC 10541
добавление Staphylococcus
детергента для aureus
предотвращения ATCC 6538 P
